# Metabolomics

## 非靶代谢组学样本制备（贴壁细胞）

注意：细胞要求至少1\*10^7。需计数，保持每个样品细胞数相同。

1、快速倒掉培养基；

2、加入<mark style="color:red;">4℃预冷的PBS</mark> 缓冲液或者生理盐水反复冲洗3-5 次(若用移液枪加， 则靠着培养皿壁加入， 以免将细胞冲起) ；

3、收集贴壁细胞

* 方法一：加入1.5mL 无菌1×PBS 溶液，用移液枪吹打细胞，直到细胞全部脱离瓶底为止。对于贴壁牢固的培养细胞，可以用细胞刮勺剥离细胞。将细胞连同PBS 溶液一起收集到EP 管中。
* 方法二：加入正好能盖住单层细胞的胰酶溶液，如10cm 培养皿需加入<mark style="color:red;">1mL</mark> 胰酶溶液。轻轻晃动器皿使胰酶均匀分布在细胞层上，直到细胞松动（一般1-2 分钟）。一旦细胞松动，尽快<mark style="color:red;">弃去胰酶</mark>溶液（倾斜平皿或培养瓶以便用枪头尽量吸去多余的溶液），加入<mark style="color:red;">1×PBS</mark> 溶液，用移液枪吹下贴壁的细胞。

4、将细胞连同PBS 溶液一起收集到1.5mL EP 管，吹匀后计数。取相同量细胞至新的EP管，<mark style="color:red;">1000g\*4℃离心10min</mark>，去上清，收集沉淀细胞。

5、<mark style="color:red;">液氮速冻15min</mark> 后，立即保存至-80℃冰箱，注意避免反复冻融，干冰运输。