# 分子克隆-同源重组（质粒点突变、截短）

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诺唯赞同源重组试剂盒
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## 载体线性化

* 根据载体的酶切位点，选择相应的限制性内切酶（推荐使用双酶切）进行酶切反应，然后进行DNA电泳及胶回收。

## 插入片段获得

* 在插入片段正反向PCR扩增，引物的5’端引入线性化载体两末端同源序列，使扩增 后的插入片段5'和3'最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应一致的同源序列（15 - 20 bp， 不包括酶切位点）。
* 引物设计方法：

<figure><img src="https://3583750438-files.gitbook.io/~/files/v0/b/gitbook-x-prod.appspot.com/o/spaces%2FrNJkPTdpyVMk09ldgu9A%2Fuploads%2FbtZbRdpin5gbE6KRCvY0%2Fimage.png?alt=media&#x26;token=1023e600-816a-4a6f-ae64-10e3d82b3df9" alt=""><figcaption></figcaption></figure>

## 重组反应

* 根据说明书，利用同源重组酶将片段与线性化的载体进行连接。

## 质粒转化、测序、抽提

* 参见前述章节。