分子克隆-同源重组（质粒点突变、截短）

By Frederick & Mariana

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C112说明书-V22.1.pdf

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诺唯赞同源重组试剂盒

载体线性化

• 根据载体的酶切位点，选择相应的限制性内切酶（推荐使用双酶切）进行酶切反应，然后进行DNA电泳及胶回收。

插入片段获得

• 在插入片段正反向PCR扩增，引物的5’端引入线性化载体两末端同源序列，使扩增 后的插入片段5'和3'最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应一致的同源序列（15 - 20 bp， 不包括酶切位点）。

• 引物设计方法：

重组反应

• 根据说明书，利用同源重组酶将片段与线性化的载体进行连接。

质粒转化、测序、抽提

• 参见前述章节。