By Frederick & Mariana
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根据载体的酶切位点,选择相应的限制性内切酶(推荐使用双酶切)进行酶切反应,然后进行DNA电泳及胶回收。
在插入片段正反向扩增引物的5’端引入线性化载体两末端同源序列,使扩增 后的插入片段5'和3'最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应一致的同源序列(15 - 20 bp, 不包括酶切位点)。
引物设计方法: