细胞黏附实验

By K.Y.

1、体外黏附实验

• 参考文献：Mechano-induced cell metabolism promotes microtubule glutamylation to force metastasis

• 基质蛋白涂覆：

  • 在培养板孔中加入基质蛋白溶液（如鼠尾胶原I、纤连蛋白、层粘连蛋白），使其覆盖底部；

  • 在4°C下孵育过夜，确保基质蛋白充分吸附到培养板表面；

  • 次日，用PBS洗涤板孔以去除未吸附的基质蛋白；

• 消化细胞，用PBS洗涤3次，计数；

• 将3*10^4个细胞（通常每孔10^4-10^5个细胞）接种到预先涂有胶原蛋白的24孔板中；

• 在37°C、5% CO2的孵育箱中孵育15分钟到30分钟（具体时间根据实验要求调整），使细胞充分粘附；

• 孵育结束后，用预温的培养基或PBS轻轻洗涤培养板，以去除未粘附的细胞。每孔洗涤2-3次，确保去除所有未粘附的细胞；

• 用4%PFA 固定20min，用PBS洗涤2-3次；

• DAPI（结晶紫）染色，PBS洗涤；

• 对总面积上的所有细胞进行计数，使用 ImageJ 软件对细胞核进行计数和分析。

2、HUVEC粘附试验

• 参考文献：Inhibition of TRPV4 remodels single cell polarity and suppresses the metastasis of hepatocellular carcinoma

• 将HUVEC接种在六孔板（或共聚焦皿）中，第二天它们生长成致密的细胞单层。

• 将肿瘤细胞悬浮培养并处理，然后用Dil（Beyotime）染色30分钟，用无血清培养基洗涤两次并收集。

• 以每孔1*10^6个/mL的密度将收集的细胞接种在含有HUVEC的六孔板中

• 将肿瘤细胞和HUVEC在无血清培养基中共孵育1小时

• 用PBS轻轻洗涤两次，然后在室温下置于黑暗中10分钟。

• 使用荧光显微镜拍摄粘附的细胞；用Imagine J处理数据以获得平均荧光强度。