⏲️细胞周期检测

By Kaiyi

实验步骤

Day0

• 提前一天铺板，12孔板，2*10^5细胞/孔。

Day1

• 洗涤：消化后转移至流式管，PBS重悬细胞，500G离心5min，弃去上清，刮匀细胞

• 每管（50μL液体）加0.5μL Fc-Block（人Fc-Block在4度冰箱蓝色盒子，小白瓶），4℃静置10min

• 分管，分出blank管，PB通道L/D单染管，PE通道PI单染管

• 每样本管及L/D单染管加0.2 μL PB L/D（-20度冰箱流式抗体盒），避光4℃静置30min

• 每管加2mL PBS，500G离心5min，弃去上清，刮匀细胞

• 每管加1mL 70%乙醇（现配，预冷），-20℃固定过夜

Day2

• 每管加2mL PBS，500G离心5min，弃去上清，刮匀细胞；重复洗涤一次

• 500μL PBS重悬细胞，加20μL RNAase A（-20冰箱），37℃避光孵育30min

• 500G离心5min，弃去上清，刮匀细胞

• 500μL PBS重悬，每管加0.5μL PI染料（-20冰箱），37℃避光孵育30min

• 不用洗涤，直接上机检测